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是什么影響了ELISA試劑盒質(zhì)保？

更新時(shí)間：2020-07-06 點(diǎn)擊次數(shù)：1575次

　　ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到*科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實(shí)驗(yàn)中比較常見的問題，那么，ELISA試劑盒變質(zhì)是因?yàn)槭裁茨兀渴鞘裁从绊懥薊LISA試劑盒質(zhì)保？一旦變質(zhì)會(huì)有什么影響呢？今天凱學(xué)生物科技為大家詳細(xì)分析下。

　　一、方法學(xué)的影響

　　ELISA測(cè)定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不gong平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。

　　二、試劑因素

　　不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致，即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對(duì)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

　　三、樣本因素

　　標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。

　　四、操作因素

　　ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。

　　五、灰區(qū)的設(shè)置

　　通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來報(bào)告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。

　　六、標(biāo)本復(fù)查

　　ELISA手工檢測(cè)過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。

　　七、常表示結(jié)果的常用方法

　　a.定性測(cè)定

　　b.半定量測(cè)定結(jié)果一般以滴度表示。

　　c.定量測(cè)定即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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